液相色谱系统测定原理

液相色谱系统是重要的色谱方法，是在经典液相色谱法和气相色谱的基础上发展起来的，(经典液相色谱法使用粗粒多孔固定相，装填在大口径、长玻璃管柱内，流动仅靠重力流经色谱柱，溶质在固定相的传质、扩散速度极其缓慢，柱入口压力低，仅有低的柱效，分析时间长;气相色谱原理类似，流动相为气体，只能分离小分子量、低沸点的有机化合物，配合程序升温可分析高沸点的有机化合物。)弥补了经典液相色谱法和气相色谱的缺点。

液相色谱系统使用了多孔微粒固定相，装填在小口径短的不锈钢柱内，流动相通过高压输液泵进入高压的色谱柱，溶质在其中的传质、扩散速度大大加快，从而在短时间内获得高的分离能力。可分析低分子量、低沸点的有机化合物，更多适用于分析中、高子量、高沸点及热稳定性差的有机化合物。由于80%的有机化合物都可以用高效液相色谱法分析，目前已经广泛应用于生物工程、制药工业、食品工业、环境检测、石油化工等行业。

根据使用的固定相及流动相的极性不同，分为正相液相色谱和反相液相色谱:固定为极性，流动相为非极性的液相色谱色谱称为正相液相色谱(固定相为硅胶和氧化镁，流动相为正已烷，醚等) ;固定相为非极性，流动相为极性的液相色谱色谱称为反相液相色谱(固定相为碳粒和氧化铝，流动相为水、醇等)在液相色谱中，分离有机化合物，一般情况下用直接与标准物对照的方法，根据保留时间的不同进行化合物的定性分析。

当未知峰的保留值与某一已知标准物完全相同,则能判定未知峰可能与已知标准物为同一物质，特别是如果色谱柱条件改变，未知峰的保留值与已知标准物的保留值仍能一致，则基本判定是同一物质;定性分析后，用峰面积进行定量分析。标的物配成不同的标准，测定峰面积，作浓度和峰面衣的标准曲线，然后据未知物的峰面积，在曲线上求浓度。